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    南宮娛樂優勢
    • 質量保證 :確保製備的病毒顆粒攜帶片段的正確性 ,病毒顆粒的總數和病毒顆粒的滴度達到要求
    • 去除了病毒的關鍵蛋白 ,對人體安全 ;屬於複製缺陷型病毒 ,不會產生下一代病毒顆粒 ;已被改造為自身失活性 ,病毒轉導並整合到細胞後不再具有產生具有包裝能力的病毒基因組 。
    • 穩定整合到細胞基因組 ,可用於製備多種穩定沉默特定基因的細胞株
    原理
    慢病毒是逆轉錄病毒的一種 ,具有逆轉錄病毒的基本結構 ,但也有不同於逆轉錄病毒的組份和特性 ,作為基因治療載體發展起來 ,最近已用於轉基因動物製備 。利用慢病毒構建的shRNA/miRNA載體 ,與化學合成的siRNA和基於瞬時表達載體構建的shRNA相比 ,一方麵可以擴增替代瞬時表達載體使用 ,另一方麵 ,lentivirus-shRNA/miRNA克隆經過慢病毒包裝係統包裝後 ,可用於感染依靠傳統轉染試劑難於轉染的細胞係如原代細胞 、懸浮細胞和處於非分裂狀態的細胞 ,並且在感染後可以整合到受感染細胞的基因組 ,進行長時間的穩定表達 。
    服務流程
    • 客戶提供 :表達miRNA/shRNA的質粒(提供測序圖譜)或所要Knockdown的靶基因的名稱 、序列 ;所需要的病毒滴度及總量 ,病毒是否需要純化 ;若需要檢測靶基因的表達變化 ,如需要請提供相應的抗體
    • 含目的基因的慢病毒RNAi幹擾載體的構建和純化提取 ;
    • 慢病毒幹擾載體 、pGag/Pol 、pRev 、pVSV-G四質粒共轉染293T細胞 ;
    • 培養48~72h ,收集培養上清 ;
    • 病毒的純化和濃縮 ;
    • 滴度測定 、目的基因檢定
    • 將製得的慢病毒液轉導客戶的靶細胞 ,篩選混合穩定細胞株 ,並檢測靶基因的表達 。
    • 南宮娛樂提供 :提供重組後的慢病毒載體質粒 ,並附上對目的基因的PCR鑒定結果 ;提供已測定好滴度 、可以直接進行後續分析的慢病毒儲存液
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