質量保證 :如無特殊要求南宮娛樂將提供至少1 ml含108pfu的病毒原液 。
可獲得複製缺陷型(E1和E3缺失,為第二代病毒)的腺病毒 ,生物安全性更高 ;獲得的重組病毒在培養基中非常穩定 ,甚至反複凍融也不會喪失活力
腺病毒係統是很受歡迎的可以在任何哺乳動物細胞中高效瞬時表達的基因遞送平台。對於難轉染的細胞 ,如原代或非分裂細胞 ,采用病毒遞送外源基因的方式是非常有效的選擇 。南宮娛樂采用293A腺病毒包裝細胞係(含有腺病毒包裝所必需的E1基因序列 ,是專為生產腺病毒和進行滴度測定而建立的) ,用於高滴度的複製缺陷型(E1和E3缺失)腺病毒的生產 ,以進行外源基因的表達 。腺病毒感染幾乎所有的細胞類型,除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤細胞 。腺病毒是研究原代非增殖細胞基因表達的最佳係統 ,它可以使轉化細胞和原代細胞中得到的結果直接進行對比 ;不整合到染色體中 ,無插入致突變性 。能有效進行增殖 ,滴度高 :腺病毒係統可產生108 pfu/ml原液 ,濃縮後可達1010-1011 VP/ml ,這一特點使它非常適用於基因治療 。
1.客戶提供 :含有目標基因的質粒(提供測序圖譜)或所要表達的目的基因的名稱 ,序列 ;所需要的病毒滴度及總量 ,病毒是否需要純化 ;若需要檢測外源基因的表達 ,如需要請提供相應的抗體
2.構建含有外源基因的腺病毒表達克隆 ,采用PacI消化純化質粒使ITRs裸露出來 。
3.將腺病毒表達克隆轉染293A細胞 。收獲細胞以製備病毒粗提液 。
4.將病毒粗提液感染293A細胞以擴增病毒 。確定病毒滴度 。
5.將病毒上清加入靶細胞中
6.分析重組目的蛋白的表達
7.南宮娛樂提供 :提供重組後的腺病毒載體質粒 ,並附上對目的基因的PCR鑒定結果 ;提供已測定好滴度 、可以直接進行後續分析的腺病毒儲存液
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