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    RNA甲基化m6A研究工具
    隨著表觀遺傳學研究的不斷深入 ，組蛋白修飾和DNA甲基化修飾相關的高水平研究成果如雨後春筍般湧現 ，遍布Nature 、Cell和Science等期刊雜誌 。在分子生物學的中心法則中 ，遺傳信息從DNA 、RNA流向蛋白 。基因組DNA和組蛋白上都存在可逆的表觀遺傳學修飾 ，這些修飾可調控基因的表達 ，並由此決定細胞的狀態 ，影響細胞的分化和發育 。近兩年 ，科學家們首次發現了一種可逆性的RNA甲基化—m6A 。隨後 ，研究人員陸續定位了哺乳動物轉錄組中的m6A ，鑒定了這種動態修飾的“讀” 、“寫”和“擦除”蛋白 ，解析了m6A在轉錄後調控中的一些功能 。由此 ，RNA甲基化（m6A）研究在表觀遺傳領域開始嶄露頭角 ，成為最前沿的熱點 ！


    圖1 ：DNA, RNA, Protein的表觀遺傳修飾

    N6-甲基腺嘌呤(m6A）是真核生物最常見和最豐富的RNA分子修飾 。m6A修飾是METTL3等甲基轉移酶複合體催化的 ，而最近新發現的RNA去甲基化酶FTO和ALKBH5可以通過一種α-酮戊二酸和Fe2+依賴型的形式對m6A去甲基化 。METTL3 、FTO和ALKBH5被證明在很多生物過程中起重要作用 ，從發育和代謝到生殖 。m6A存在於很多物種質中 ，占到了RNA堿基甲基化修飾的80% 。m6A主要分布在mRNA中 ，也出現在非編碼RNA如tRNA 、rRNA和snRNA 。在轉錄成的RNA中相對高的m6A含量會影響RNA的代謝過程 ，比如剪切 ，核轉運 ，翻譯能力和穩定性 ，以及RNA轉錄 。


    圖2 ：RNA甲基化修飾示意圖


    南宮娛樂建立了子宮內膜基質細胞蛻膜化的模型 ：在雌 、孕激素處理的基礎上再加入cAMP三者聯合誘導產生蛻膜化 。采用三者聯合誘導的原因是雌激素可使子宮內膜增生 ，cAMP可通過調節轉錄因子的活性來增加子宮內膜基質細胞對孕酮的敏感性 ；同時通過檢測蛻膜化的標誌分子如PRL 、IGFBP-1 、ACP(酸性磷酸酶) 、hsp27和層粘連蛋白等來判斷誘導蛻膜是否成功 。子宮內膜基質細胞產生蛻膜化後 ，經HE染色顯示 ，細胞核呈現多核化 ，胞體大而圓 ，為蛻膜化成功一個標誌 ，如下圖所示 。


    主要產品和服務

    1）預製病毒


    基因名

    種屬

    類型

    轉錄本

    內部編號

    ALKBH5

    人

    過表達慢病毒

    NM_017758

    CL203

    ALKBH5

    大鼠

    幹擾慢病毒

    NM_001191643

    CL1931

    METTL3

    人

    過表達慢病毒

    NM_019852

    CL1638

    METTL3

    人

    幹擾慢病毒

    NM_019852

    CL1240

    METTL3

    小鼠

    過表達慢病毒

    NM_019721

    CL1032-1

    METTL14

    人

    過表達慢病毒

    NM_020961

    CL1961

    METTL14

    人

    幹擾慢病毒

    NM_020961

    CL1963

    METTL14

    小鼠

    過表達慢病毒

    NM_201638

    CL1032-2

    FTO

    小鼠

    過表達慢病毒

    NM_011936

    CL1032-3

    2）檢測整體的m6A甲基化水平 ：采用類似於ELISA競爭免疫的方法 ，樣本與m6A抗體孵育 ；然後轉移到包被有m6A多核苷酸的孔上 。樣本RNA上的m6A可競爭性抑製m6A抗體與塗抹在孔上m6A的結合 。因此 ，微孔板讀取儀測的信號與樣本中m6A的整體含量成反比 。並且樣本中m6A的量可以通過預先設定的m6A標準品來實現定量檢測 。

    3）檢測特定基因的m6A甲基化水平（MeRIP-qPCR） ：將RNA免疫共沉澱（RIP）與熒光定量PCR相結合的技術 ，通過特異性抗體富集total RNA中發生m6A甲基化修飾的RNA ，借助特異性引物實現對m6A修飾的RNA進行定量的目的 ，可以應用於經MeRIP-seq發現的m6A修飾的基因（或已知的某個靶基因）在組間樣本中m6A修飾水平的差異 。


    4）m6A RNA甲基化測序（MeRIP-Seq） ：可進行m6A RNA甲基化譜研究 ，快速篩選m6A RNA甲基化靶基因 ；將甲基化RNA免疫共沉澱和RNA測序技術組合起來 ，可一次性檢測樣品中所有RNA分子上的m6A甲基化修飾狀況 ，並計算出不同樣本中RNA差異m6A甲基化程度 。

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